细胞鉴定系列技术服务

1.原代培养

细胞培养是生物学和医学研究中常用的手段之一，可分为原代培养和传代培养两种。原代培养是直接从生物体获取组织或器官的一部分进行培养，即组织直接从机体获取后,通过组织块长出单层细胞,或者用酶消化或机械方法将组织分散成单个细胞开始培养,在首次传代前的培养可认为是原代培养。由于培养的细胞刚刚从活体组织分离出来，故更接近于生物体内的生活状态。这一方法可为研究生物体细胞的生长，代谢，繁殖提供有力的手段。同时也为以后传代培养创造条件。

原代培养的过程指动物的组织或器官从机体取出后，经机械法或各种酶类（常用胰蛋白酶）和鳌合剂（常用EDTA)处理，使之分散成单个细胞,加入适量培养基，置于合适的培养容器中，在无菌、适当温度和一定条件下，使之生存、生长和繁殖的过程。

我们提供10⁶冻存细胞。

送样要求：新鲜组织标本

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2.STR鉴定

已开始要求细胞STR鉴定的期刊

Nature;	Cancer Prevention Research;
BioTechniques;	International Journal of Cancer;
Cancer Research;	Molecular Cancer Therapeutics;
Cancer Discovery;	Cell Biochemistry and Biophysics;
Clinical Cancer Research;	Cancer Epidemiology, Biomarkers & Prevention;
Molecular Cancer Research;	In Vitro Cellular & Developmental Biology – Anima

应用于生物医学研究领域的哺乳动物细胞被错误鉴定和交叉污染的问题，一直是一个迫在眉睫急需解决的重大问题。大量研究表明 STR 基因分型方法是进行细胞交叉污染和性质鉴定的很有效和准确的方法之一。STR已被广泛应用于亲子鉴定、个体识别、司法鉴定、交通事故鉴定（造血干细胞）移植治疗后嵌合情况监测等领域。

送样要求：

（1）细胞悬液（细胞数≥106 个）

（2）基因组DNA（≥20μL，浓度≥50ng/μL）

鉴定结果例图： 

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3.免疫荧光鉴定

每种细胞都有自身特异性表达的标记物，故可以对细胞进行特异性鉴定。免疫荧光鉴定的基本原理是：通过荧光抗体与细胞表面抗原的特异性结合，洗涤除去游离的荧光抗体后，于荧光显微镜下观察，在黑暗背景上可见明亮的特异荧光，即可对标本中的抗原物质进行鉴定。

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4.流式细胞鉴定

每种细胞都有自身特异性表达的标记物，故可以对细胞进行特异性鉴定。用荧光标记的单克隆抗体来识别细胞表面的抗原（也就是所谓的表面标记），然后通过流式细胞仪来检验表面抗原的多少和种类（也就是荧光强度，代表了抗体结合的种类和数量）来鉴定细胞所属的类别。

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注：流式分选开机和消毒费：1200元

5.透射电镜检测

结构的研究从尺度方面可以分为宏观研究和微观研究，而生命科学的研究主要集中在微观方面，在群体-个体-系统-器官-组织-细胞-亚细胞-大分子-小分子各个水平上的研究会用到不同的手段。

细胞内部结构及相关细胞器多数在0.2um-0.2nm之间，这个尺度又称为亚细胞结构或者超微结构，而细胞结构的变化主要表现在亚细胞水平，每种细胞具有自己特异性亚显微器官，故透射电子显微镜（TEM）是细胞的又一种鉴定方法。

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6.支原体污染检测

支原体是实验室中常见的污染细胞的原核生物。支原体会改变宿主细胞的结构和功能等一系列特征，造成实验结果不准。抑制细胞代谢和生长，改变核酸合成，影响细胞抗原性，导致染色体改变，干扰病毒复制以及模仿病毒的作用。因此每一株外来细胞在进入实验室之前和原代分离的细胞都应通过支原体检测，并且应对培养中的细胞进行定期支原体检测。

可用PCR检测法鉴定支原体污染现象。

送样要求：

（1）细胞悬液：细胞培养两天后，吸取1ml的培养基上清，先2000rpm离心3min去除残缺细胞，再吸取上清至新的EP管中，12000rpm离心10min，去除上清，留约20ul液体，吹打混匀后，取2ul做PCR模板，检测。

（2）离心沉淀物：在无抗生素及其它抑菌或灭菌物质条件下培养3天，取1.0ml 细胞培养上清液移至2ml 离心管中。250g 离心5min 以沉积细胞碎片。将上清液移入无菌离心管以15,000-20,000g 速度离心10 分钟，小心地移除上清液，保留离心沉淀物，加入50μ缓冲液混合，请加冰袋运输。 

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