Tunel（凋亡） 

      TUNEL是分子生物学与形态学相结合的一种研究方法。细胞凋亡过程中，染色体DNA发生双链断裂或单链断裂，从而

产生大量带有游离3'末端的DNA片段。脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT）可以将荧光素、过氧化物酶、碱性磷酸化酶或生

物素形成的衍生物标记到DNA的3'-末端，从而对凋亡细胞或凋亡小体进行原位染色，检测细胞凋亡。

      TUNEL法是在细胞和组织层次上进行生物学反应，结果直观，便于观察；可检测出极少量的凋亡细胞，灵敏度远比一般

的组织化学和生物化学测定法要高。

 实验步骤：

   1. 充分脱蜡和水化

   2. 3%过氧化氢甲醇中浸洗10min，抑制内源性过氧化氢酶

   3. 用蛋白酶K（20μg/ml溶于Tris/HCl中，pH7.4~8.0）室温孵育15min

   4. PBS洗2次，每次5min，擦干样品周围的水

   5. 此阶段配制TUNEL反应混合物——从试剂2中取出100μl标记溶液作为两个阴性对照；将试剂1

   中取5μl+试剂2中45μl标记液中，配成50μl TUNEL反应混合物混匀（即配即用，4℃避光）

   6. 标记反应：滴加50μl的TUNEL反应混合液，在湿盒中37℃孵育60min。PBS洗3次，每次5min，样品可

   在荧光显微镜下（绿色）分析结果

   7. 信号转化和分析：擦干样品周围的水分，加入50ul转化剂-POD，湿盒中37℃孵育30min。PBS洗5min*5次

   8. 加入50~100μl DAB底物溶液，室温（10~25℃）孵育5 min，PBS洗5min*3次

   9. 中性树胶或者甘油封片（在封片前可以复染），光镜下分析结果

   我们提供：

   1. 提供完成实验的玻片

   2. 提供具体的实验方法、步骤、所用试剂、仪器、及相关分析数据等，实验结果将以电子或书面形式提交给您

   结果示意图： 

   服务周期：

  温馨提醒：

   1. 提供新鲜的组织、固定过的组织、石蜡包埋的组织、细胞爬片、石蜡切片、冰冻切片

      2. 提供具体的拍照部位