Realtime PCR

      实时荧光定量PCR技术是在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，通过标准曲线

对未知模板进行定量分析的方法。该技术不仅实现了对DNA模板的定量而且具有灵敏度高、特异性和可靠性更强、能实现多

重反应、自动化程度高、无污染性、具实时性和准确性等特点。

  实验步骤：

     1. 样品获取、处理和制备

 1.1 悬浮细胞：将悬浮细胞1×10⁶ 个/mL培养液倒入离心管中，离心沉淀细胞。PBS冲洗2次，将细胞离心底部，向离心管中

 加入500-1000μl Trizol，然后置于-80度冰箱保存。或者将离心底部的干细胞置于-80度冰箱保存。

1.2 贴壁细胞：用胰酶消化细胞1×10⁶个/mL，离心PBS冲洗2次，将细胞离心底部，向离心管中加入500-1000μl Trizol，然

后置于-80度冰箱保存。或者将离心底部的干细胞置于-80度冰箱保存。

1.3 组织：采集新鲜组织100mg，放入离心管中，做好标记，于液氮冷冻片刻后，置于-80度冰箱保存。

1.4 血液：用抗凝管收集的全血1mL，加入RNA保护剂，做好标记，置于-80度冰箱保存。

    2. RNA或DNA质控

    3. 反转录

    4. 引物验证

    5. qPCR过程

    6. 数据分析

  我们提供：

  1. 抽取的RNA和电泳图及逆转录的cDNA样本

  2. 操作步骤及详细的试剂和耗材

  3. 引物序列

  4. 溶解曲线和扩增曲线

  5. 原始数据及处理后的正式实验数据

  实验器材：